学会活動（2009.12.2更新）
ここでは、当院の学会での活動（発表内容、参加報告など）を紹介しています。

学会発表

ESHRE （2010.6.27-30、Rome, Italy）

Perinatal outcomes following transfer of human blastocysts vitrified at day 5, 6 and 7 Hiraoka, K.; Hiraoka, K.; Miyazaki, M.; Fukunaga, E.; Horiuchi, T.; Kusuda, T.; Okano, S.; Kinutani, M.; and Kinutani, K.

Introduction Little information is available on perinatal outcome of cryopreserved day-7 blastocyst transfer. In the present report, perinatal outcomes for transfers of cryopreserved blastocysts by a vitrification method were examined with respect to the day of blastocyst expansion among on day 5, 6 or 7 before cryopreservation. Material and methods We investigated 263 cycles of vitrified-warmed blastocyst stage embryo transfer performed between April 2005 and April 2009, which were reviewed retrospectively. There were 144 cycles with day-5 blastocyst, 100 cycles with day-6 blastocyst, and 19 cycles with day-7 blastocyst transfers. Blastocysts were vitrified by the cryotop method on day 5, 6, or 7, depending on day of expansion. As the base medium, modified HTF plus 20% serum substitute supplement was used. The equilibration solution contained 7.5% ethylene glycol (EG) and 7.5% dimethyl sulphoxide (DMSO). The vitrification solution was composed of 15% EG, 15% DMSO and 0.5 mol/l sucrose. Before starting the vitrification procedure, artificial shrinkage of blastocysts was performed in the equilibration solution by mechanical pipetting with a fine hand-drawn glass pipette slightly smaller in diameter than the blastocyst. After blastocoele contraction, the blastocysts were equilibrated in the same equilibration solution for another 2 min before exposure to the vitrification solution. The blastocysts were then incubated in vitrification solution and loaded, within 45 s onto the tip of the cryotop and submerged into liquid nitrogen. For warming, the vitrified blastocysts were immersed into 1.0 mol/l sucrose solution for 1 min. The blastocysts were then transferred into 0.5 mol/l sucrose solution for 3 min and washed twice in the base medium for 5 min. As soon as warming of blastocysts had completed, total removal of the zona pellucida was performed using a laser and mechanical pipetting. Warmed blastocyst transfer was performed in hormonal replacement treatment cycles on day 5 endometrium. Results There were no differences among the vitrified day-5, day-6 and day-7 blastocyst transfer groups regarding survival rate (99.5%; 213/214, 97.9%; 142/145 and 100.0%; 28/28), mean number of embryos transferred ± SD (1.5 ± 0.5, 1.4 ± 0.5 and 1.4 ± 0.5), pregnancy rate (53.5%; 77/144, 53.0%; 53/100 and 52.6%; 10/19), implantation rate (42.3%; 90/213, 41.5%; 59/142 and 42.9%; 12/28) and spontaneous abortion rate (24.7%; 19/77, 30.2%; 16/53 and 30.0%; 3/10). At this time, 89 infants from 78 deliveries (11 twins) have been born with no reported abnormalities. There were 52 infants from 46 deliveries (6 twins) with day-5 blastocyst, 29 infants from 25 deliveries (4 twins) with day-6 blastocyst, and 8 infants from 7 deliveries (1 twins) with day-7 blastocyst. There were no differences among the vitrified day-5, day-6 and day-7 blastocyst transfer groups in the mean gestational age (wk) ± SD (38.6 ± 2.0, 38.4 ± 2.0 and 39.4 ± 2.0), preterm (< 37 wk) delivery rate (15.2%; 7/46, 20.0%; 5/25 and 14.3%; 1/7) and mean birth weight (g) ± SD (2961 ± 524, 2898 ± 424 and 3088 ± 270). Conclusions These results indicated that blastocysts have similar inherent viability regardless of whether they develop by day 5, 6 or 7 and that vitrified human day-7 blastocyst transfer can contribute to increasing cumulative pregnancy rates in assisted reproduction. However, it will require more data on vitrified day-7 blastocyst transfer to determine the risk of spontaneous abortions and birth defects from these more slower developing embryos. Until these data are collected and analyzed, vitrified day-7 blastocyst transfer should be approached with caution.

第51回日本哺乳動物卵子学会胚培養士セッション(2010.5.29-30, 新潟)

凍結精子・卵子・胚の管理、Management of cryopreserved sperms, oocytes and embryos 平岡　謙一郎

ARTラボにおいて、凍結保存した精子・卵子・胚の管理は重要な事項であるにも関わらず、これらの項目に関する情報・報告は少なく、また、これといった統一基準もないため、それぞれの施設で独自に行われている。以下、凍結した検体の管理において重要と思われる項目を挙げてみた。 検体の管理 ・保存容器及び保管場所の識別 ・記録内容 ・記録の管理 保存タンクの管理 ・識別方法 ・保管場所 ・メンテナンス 保存タンク内の液体窒素の管理 ・液体窒素の滅菌 ・市販の液体窒素の清浄性 ・タンク内の液体窒素の残量のチェック ・液体窒素の補充 凍結保存期間の管理 ・凍結保存期間 ・連絡の取れない患者の検体の取り扱い ・検体の廃棄 凍結保存に関するヒヤリ・ハット ・事例とその対策 感染症患者に対する管理 ・保管方法 以上の項目に関して、これまでに学会・論文等で報告されている内容あるいは他のART施設の現状を出来るだけ多く調査し、まとめて報告する。

第5回日本レーザーリプロダクション学会 (2010.3.7, 大阪）

レーザーにより透明帯を菲薄化（分割期）あるいは開孔（胚盤胞期）する範囲が凍結融解分割期胚移植の臨床成績におよぼす影響 医療法人　絹谷産婦人科クリニック 平岡　謙一郎、平岡　夏織、宮崎　美由紀、福永　恵美、楠田　朋代、岡野　真一郎、絹谷　正之、絹谷　一雄

【目的】レーザーにより透明帯を菲薄化（分割期）する範囲(実験1)、あるいは、開孔（胚盤胞期）する範囲(実験2)が凍結融解分割期胚移植の臨床成績におよぼす影響を調べた。 【対象および方法】レーザー装置にはZILOS-tk(Hamilton Thorne Biosciences)を用い、透明帯に5〜10μmの穴を連続的に開けることにより透明帯の菲薄化あるいは開孔を行った。 実験1：凍結融解分割期胚を移植した120症例120周期を対象とした。このうち、透明帯外周の1/4を菲薄化(図1A)してから移植した60症例60周期を1/4菲薄化群、透明帯外周の1/2を菲薄化(図1B)してから移植した60症例60周期を1/2菲薄化群とし、両群の臨床成績を比較した。 実験2：凍結融解分割期胚より発生した胚盤胞を移植した71症例71周期を対象とした。このうち、透明帯外周の1/8(約40μm)を開孔(図1C)してから移植した40症例40周期を1/8開孔群、透明帯外周の1/2を開孔(図1D)してから移植した31症例31周期を1/2開孔群とし、両群の臨床成績を比較した。尚、胚盤胞を0.2Mショ糖溶液に浸漬し、胚盤胞を収縮させて囲卵腔を拡げてから透明帯を開孔した(図1C, D)。 【結果】統計処理にはχ2検定あるいはフィッシャーの直接確率計算法を適宜用いた。有意差の判定に用いたP値は5%水準とした。 実験1：1/4菲薄化群および1/2菲薄化群の妊娠率はそれぞれ25%(15/60)と47%(28/60)、着床率は16%(16/99)と32%(33/103)、流産率は13%(2/15)と11%(3/28)となり、妊娠率および着床率において、1/2菲薄化群が1/4菲薄化群に比べて有意に高い値を示した(P = 0.013、P = 0.008)。一方、流産率において両群の間に有意な差は認められなかった(P = 1.000)。 実験2：1/8開孔群および1/2開孔群の妊娠率はそれぞれ43%(17/40)と74%(23/31)、着床率は27%(17/62)と52%(27/52)、流産率は12%(2/17)と13%(3/23)となり、妊娠率および着床率において、1/2開孔群が1/8開孔群に比べて有意に高い値を示した(P = 0.009、P = 0.012)。一方、流産率において両群の間に有意な差は認められなかった(P = 1.000)。 【考察】レーザーにより透明帯を菲薄化あるいは開孔する範囲は凍結融解分割期胚移植の妊娠率および着床率に影響をおよぼし、菲薄化(分割期)する範囲、あるいは、開孔(胚盤胞期)する範囲は広い方が臨床成績を改善することが示唆された。

LASER TOKYO 2009 (2009.11.29-12.3, Tokyo）

凍結融解初期胚より発生したヒト7日目脱出胚盤胞の再凍結融解胚移植により妊娠が成立した1例 Laser assisted hatching for cryopreserved cleaved embryos. Kinutani Women’s Clinic K Hiraoka

Aims and Background: Assisted reproductive technology generally produces surplus embryos that can be cryopreserved for later use. The success of a cryopreservation programme will undoubtedly increase the cumulative pregnancy rates. Success associated with the transfer of cryopreserved embryos has been generally lower than that obtained with fresh embryo transfer. One explanation may be due to zona pellucida (ZP) hardening during the cryopreservation process. Therefore, an artificial thinning or opening in the ZP, i.e. assisted hatching (AH), may be useful for cryopreserved embryo transfer. Recently, AH by 1.48 mm diode laser has been introduced and has enabled to reliably produce equally sized ZP thinning or opening. However, studies evaluating the effect of the size of ZP thinning or opening for cryopreserved embryos by laser AH are lacking. The aim of this study was to evaluate the results of two different sizes (quarter or half of ZP) of ZP thinning by laser AH for cryopreserved cleaved embryos (Experiment 1) and two different sizes (one eighth or half of ZP) of ZP opening by laser AH for cryopreserved cleaved embryos that were cultured to blastocyst (Experiment 2). Materials and Methods: Experiment 1: A total of 120 cryopreserved cleaved embryo transfers were assigned to either quarter or half of ZP thinning group. Laser AH was conducted at the cleavage-stage. Experiment 2: A total of 71 cryopreserved cleaved embryo transfers were assigned to either one eighth or half of ZP opening group. The cryopreserved cleaved embryos were cultured to blastocyst and laser AH was conducted at the blastocyst-stage. Results: Experiment 1: The rates of clinical pregnancy (46.7 versus 25.0%) and implantation (32.0 versus 16.2%) were significantly greater in the half thinning group than in the quarter thinning group (P = 0.0218 and P = 0.0090, respectively). Experiment 2: The rates of clinical pregnancy (74.2 versus 42.5%) and implantation (51.9 versus 27.4%) were significantly greater in the half opening group than in the one eighth opening group (P = 0.0090 and P = 0.0117, respectively). Conclusions: Our results suggest that the area of ZP thinning or opening can affect the outcome of cryopreserved embryo transfer and that higher pregnancy and implantation rates can be attained as the area of ZP thinning or opening increases up to half. The laser seems to be beneficial, allowing for quick, easy-to-perform in a clinical situation where half of ZP needs to be thinned or opened.

第54回日本生殖医学会（2009.11.22-23、金沢）

胚盤胞の日齢が凍結融解胚盤胞移植の臨床成績におよぼす影響 医療法人　絹谷産婦人科クリニック 平岡　謙一郎、楠田　朋代、岡野　真一郎、絹谷　正之、絹谷　一雄

【目的】胚盤胞の日齢が凍結融解胚盤胞移植の臨床成績におよぼす影響は明らかではない。そこで、今回我々は5日目、6日目、7日目胚盤胞の凍結融解胚移植の臨床成績を比較した。 【対象】患者の同意の上、2005年4月から2009年4月までに凍結融解胚盤胞移植を行った264周期を対象に、5日目胚を移植した144周期を5日目胚群、6日目胚を移植した100周期を6日目胚群、7日目胚を移植した19周期を7日目胚群とし、3群の凍結融解後の生存率、胚移植後の妊娠率、着床率及び流産率を比較した。また、出産に至った症例について、出産時の在胎週数及び出生児体重を比較した。 【方法】胚盤胞の凍結は、保存容器にクライオトップ（北里サプライ）を用い、人工的胞胚腔収縮操作を併用したガラス化法により行った。胚盤胞の融解はホルモン補充周期下に行い、移植前に透明帯を完全に除去する透明帯孵化補助を施行した。回復培養後、胞胚腔の再拡張が認められた胚を生存と判定し、胚移植後の妊娠成立の有無は経膣超音波検査による胎嚢の確認で判定した。 【結果】5日目胚群、6日目胚群、7日目胚群の融解後の生存率はそれぞれ99.5％(213/214)、97.9％(142/145)、100.0％(28/28)、胚移植後の妊娠率は53.5％(77/144)、53.0％(53/100)、52.6％(10/19)、着床率は42.3％(90/213)、41.5％(59/142)、42.9％(12/28)、流産率は23.4％(18/77)、30.2％(16/53)、30.0％(3/10)で、生存率、妊娠率、着床率及び流産率いずれにおいても3群の間に統計学的に有意な差は認められなかった。また、5日目胚群、6日目胚群、7日目胚群の出産児数（男：女）はそれぞれ37人(21:16)、25人(15:10)、7人(5:2)、平均在胎週数は38.7週、38.6週、39.3週、平均出生児体重は3006g、2893g、3082gで、平均在胎週数及び平均出生児体重の比較においても3群の間に統計学的に有意な差は認められなかった。 【考察】胚盤胞の日齢は凍結融解胚盤胞移植の臨床成績に影響しないことが示唆された。

第50回日本哺乳動物卵子学会（2009.5.8-9、東京）

凍結融解初期胚より発生したヒト7日目脱出胚盤胞の再凍結融解胚移植により妊娠が成立した1例 医療法人　絹谷産婦人科クリニック 平岡謙一郎、平岡夏織、楠田朋代、岡野真一郎、絹谷正之、絹谷一雄

【目的】ヒト生殖補助医療において、7日目胚盤胞、脱出胚盤胞の凍結保存、あるいは凍結融解初期胚より発生した胚盤胞の再凍結保存に関する報告は少ない。今回我々は、凍結融解初期胚より発生した7日目脱出胚盤胞の再凍結融解胚移植により妊娠に成功したので報告する。 【方法】初期胚および脱出胚盤胞の凍結は保存容器にクライオトップ（北里サプライ）を用いたガラス化法により行った。平衡液には7.5% EG + 7.5% DMSO溶液、ガラス化液には15% EG + 15% DMSO + 0.5M sucrose溶液を用いた。初期胚の平衡は平衡液に浸漬後、収縮した割球の大きさが平衡する前と同じ大きさに戻るまで行った。脱出胚盤胞の平衡は平衡液に浸漬後、脱出胚盤胞よりも一回り小さい直径のガラスピペットでピペッティングを行うことにより、胞胚腔が完全に収縮するまで行った。平衡処理を終えた胚をガラス化液に浸漬後、約1μlのガラス化液と共に1分以内にクライオトップの先端部に載せ、液体窒素中に投入した。融解は1.0M sucrose溶液にクライオトップの先端部を投入して行い、融解後の胚を0.5M sucrose溶液に3分間、0M sucrose溶液に2回各5分間浸漬した。 【結果】妻30歳、夫32歳のとき原因不明の原発性不妊として当院で体外受精の治療を開始した。ロング法により卵巣刺激を行い、経膣超音波ガイド下に13個の成熟卵子を採取し、6個を媒精に供し5個が受精、7個を顕微授精に供し7個が受精し、合計12個の受精卵が得られた。採卵後3日目に初期胚を2個移植したが妊娠成立には至らず、余剰胚10個は同日にガラス化法により凍結保存した。3ヶ月後に2個の凍結胚を融解しホルモン補充周期下に移植したところ、単胎妊娠が成立し、健常児の出産に至った。2人目希望のため、採卵から3年後に2個の凍結胚を融解しホルモン補充周期下に移植したところ、妊娠成立に至ったものの妊娠 7週で流産となった。それから6ヶ月後に、残り6個の凍結胚を全て融解し（この日を3日目とした）、胚盤胞培養したが5日目、6日目に胚盤胞は得られず移植はキャンセルとなった。培養を継続したところ、7日目に脱出胚盤胞1個が発生したため再凍結保存をガラス化法により行った。再凍結しておいた7日目脱出胚盤胞を2ヶ月後に融解し、ホルモン補充周期下に移植したところ単胎妊娠が成立し、現在妊娠27週で経過は順調である。 【考察】卵巣刺激および採卵は患者にとって負担が大きく、一度の採卵で得られた卵子を最大限有効に用いることは臨床上極めて重要である。今回、我々は凍結融解初期胚より発生した7日目脱出胚盤胞が、再凍結融解後においても妊娠・出産に至ることを世界で初めて経験した。今後は症例を重ね、その有用性および安全性について検討していくことが重要と考えられた。

第50回日本哺乳動物卵子学会（2009.5.8-9、東京）

透明帯を菲薄化する範囲が凍結融解初期胚移植の臨床成績におよぼす影響 医療法人　絹谷産婦人科クリニック 平岡謙一郎、平岡夏織、楠田朋代、岡野真一郎、絹谷正之、絹谷一雄

【目的】透明帯孵化補助にレーザーを用いることで、透明帯を正確に菲薄化することができる。しかし、菲薄化する範囲は報告により異なり、透明帯孵化補助に適した菲薄化の範囲は明らかではない。そこで、今回我々は透明帯を菲薄化する範囲が凍結融解初期胚移植の臨床成績におよぼす影響を前方視的に比較検討した。 【対象】患者の同意の上、2005年9月から2008年9月までに凍結融解初期胚（採卵後2日目あるいは3日目胚）をホルモン補充周期下に移植した120症例120周期を対象とし、胚移植前に無作為に、透明帯外周の25%を菲薄化する透明帯孵化補助を行うAH25%群（60症例60周期）と透明帯外周の50%を菲薄化する透明帯孵化補助を行うAH50%群（60症例60周期）に分けた。 【方法】初期胚の凍結は保存容器にクライオトップ（北里サプライ）を用いたガラス化法により行った。平衡液には7.5% EG + 7.5% DMSO溶液、ガラス化液には15% EG + 15% DMSO + 0.5M sucrose溶液を用いた。初期胚の平衡は平衡液に浸漬後、収縮した割球の大きさが平衡する前と同じ大きさに戻るまで行った。平衡処理を終えた胚をガラス化液に浸漬後、約1μlのガラス化液と共に1分以内にクライオトップの先端部に載せ、液体窒素中に投入した。融解は1.0M sucrose溶液にクライオトップの先端部を投入して行い、融解後の胚を0.5M sucrose溶液に3分間、0M sucrose溶液に2回各5分間浸漬した。融解操作終了直後に、Pulse 300μsec（Power 100%）のレーザー（Zilos-tk：Hamilton Thorn社、USA）を用い、透明帯に直径5μmの穴を連続的に開けることにより透明帯外周の25%（AH25%群）、あるいは、透明帯外周の50%（AH50%群）の範囲を菲薄化する透明帯孵化補助を行った。胚移植後、妊娠成立の有無は経膣超音波検査による胎嚢の確認で判定した。 統計処理にはカイ二乗検定あるいはフィッシャーの直接確率計算法を適宜用いた。有意差の判定に用いたP値は5%水準とした。 【結果】AH25%群とAH50%群の凍結融解後の生存率はそれぞれ95%(99/104)と96%(103/107)、胚移植後の妊娠率は25%（15/60）と47%（28/60）、着床率は16%（16/99）と32%（33/103）、流産率は13% （2/15）と11%（3/28）となり、妊娠率、着床率において、AH50%群がAH25%群に比べて統計学的に有意に高い値を示した（P = 0.013、P = 0.008）。一方、凍結融解後の生存率および流産率において両群の間に有意な差は認められなかった。 【考察】今回の比較検討の結果、透明帯を菲薄化する範囲は凍結融解初期胚移植の妊娠率、着床率に影響をおよぼし、菲薄化する範囲は広い方が臨床成績を改善することが示唆された。

第4回日本レーザーリプロダクション学会（2009.3.15、東京）

レーザーにより透明帯を菲薄化する範囲が凍結融解初期胚移植の臨床成績におよぼす影響 医療法人　絹谷産婦人科クリニック 平岡　謙一郎、平岡　夏織、楠田　朋代 、岡野　真一郎、絹谷　正之、絹谷　一雄

【目的】レーザーにより透明帯を菲薄化する範囲が凍結融解初期胚移植の臨床成績におよぼす影響を前方視的に調べた。 【対象および方法】凍結融解初期胚を移植した120症例120周期を対象とした。このうち、レーザーにより透明帯全周の25%を菲薄化してから移植した60症例60周期を25%群、透明帯全周の50%を菲薄化した60症例60周期を50%群とし、妊娠率、着床率および流産率を比較した。 【結果】25%群および50%群の妊娠率はそれぞれ25%（15/60）と47%（28/60）、着床率は16%（16/99）と32%（33/103）、流産率は13%（2/15）と11%（3/28）となり、妊娠率および着床率において、50%群が25%群に比べて有意に高い値を示した（P＜0.02）。一方、流産率において両群の間に有意な差は認められなかった。 【考察】レーザーにより透明帯を菲薄化する範囲は凍結融解初期胚移植の妊娠率および着床率に影響をおよぼし、菲薄化する範囲は広い方が臨床成績を改善することが示唆された。

第11回IVF学会（2008.10.11-12、大阪）

凍結融解初期胚より発生した7日目胚盤胞の再凍結融解胚移植により妊娠・出産に成功した1例 医療法人　絹谷産婦人科クリニック 平岡謙一郎、藤本有美、立秋優子、平岡夏織、岡野真一郎、絹谷正之、絹谷一雄

【目的】7日目胚盤胞の凍結融解胚移植による妊娠・出産の報告は少ない。同様に、凍結融解初期胚より発生した胚盤胞の再凍結融解胚移植による妊娠・出産の報告も少ない。今回我々は凍結融解初期胚より発生した7日目胚盤胞の再凍結融解胚移植により妊娠・出産に成功した症例を経験したので報告する。 【対象および方法】症例は妻32歳、夫33歳。排卵障害による続発性不妊症。 ＜凍結＞初期胚および胚盤胞の凍結は保存容器にクライオトップ（北里サプライ）を用いたガラス化法により行った。平衡液には7.5% EG + 7.5% DMSO溶液、ガラス化液には15% EG + 15% DMSO + 0.5M sucrose溶液を用いた。初期胚の平衡は平衡液に浸漬後、収縮した割球の大きさが平衡する前と同じ大きさに戻るまで行った。胚盤胞の平衡は平衡液に浸漬後、胚盤胞よりも一回り小さい直径のガラスピペットでピペッティングを行うことにより、胞胚腔が完全に収縮するまで行った。平衡処理を終えた胚をガラス化液に浸漬後、約1μlのガラス化液と共に1分以内にクライオトップの先端部に載せ、液体窒素中に投入した。＜融解＞融解は1.0M sucrose溶液にクライオトップの先端部を投入して行い、融解後の胚を0.5M sucrose溶液に3分間、0M sucrose溶液に2回各5分間浸漬した。＜胚盤胞の透明帯孵化補助＞新鮮胚盤胞は0.2M sucrose溶液に浸漬して囲卵腔を拡げてから、また、凍結融解胚盤胞は、融解直後の胞胚腔が収縮して囲卵腔が広くなっている状態で、透明帯を除去する透明帯孵化補助を施行した。透明帯の除去はPulse 500μsec（Power 100%）のレーザー（Zilos-tk：Hamilton Thorn社、USA）を用い、透明帯全周の60-90%に直径10μmの穴を連続的に開けた後に胚をピペッティングし、透明帯と完全に分離させることにより行った。 【結果】1回目の体外受精治療で17個の卵子を採取し、8個を媒精に供し4個が受精、9個を顕微授精に供し9個が受精し、合計13個の受精卵が得られた。受精後3日目に初期胚を2個移植したが妊娠成立には至らず、余剰胚11個は同日にガラス化法により凍結保存した。3ヶ月後に全ての凍結胚を融解（この融解日を3日目とした）し、生存していた10個を胚盤胞培養した。5日目に初期胚盤胞1個と桑実期胚1個が発生し、透明帯孵化補助後、ホルモン補充周期下に移植したが妊娠成立には至らなかった。余剰胚8個の培養を継続したところ、6日目には胚盤胞は得られず、7日目に拡張胚盤胞3個が発生したため再凍結保存をガラス化法により行った。3ヶ月後に再凍結した7日目胚盤胞を2個融解し、透明帯孵化補助後、ホルモン補充周期下に移植したところ単胎妊娠が成立し、妊娠38週で健常児の出産に至った。 【考察】卵巣刺激および採卵は患者にとって負担が大きく、一度の採卵で得られた卵子を最大限有効に用いることは臨床上極めて重要である。今回、我々は凍結融解初期胚より発生した7日目胚盤胞が、再凍結融解後においても妊娠・出産に至ることを世界で初めて経験した。今後は症例を重ね、その有用性および安全性について検討していくことが重要と考えられた。

第11回IVF学会（2008.10.11-12、大阪）

初回ART治療におけるSplit ICSIのcIVFにおいて受精卵が得られた症例と得られなかった症例の治療成績の比較 医療法人　絹谷産婦人科クリニック 平岡謙一郎、藤本有美、立秋優子、平岡夏織、岡野真一郎、絹谷正之、絹谷一雄

【目的】初回ART治療を行う患者にとって、採取した卵子を全て媒精（conventional IVF：cIVF）に供した結果、受精卵が1個も得られずに胚移植をキャンセルすることは精神的に大きなストレスとなる。当クリニックでは初回ART治療において受精卵が得られないことを避けるためにcIVFと卵細胞質内精子注入法（intracytoplasmic sperm injection：ICSI）を併用するSplit ICSIを導入している。当クリニックが体外受精による治療を開始した2000年4月より2008年6月までに初回ART治療を行った785症例（卵子が得られなかった症例、未熟卵あるいは変性卵のみの症例を除く）のうち、cIVFのみの症例は123症例、Split ICSIの症例は274症例、ICSIのみの症例は388症例であった。このうち、cIVFにおいて受精卵が0個であった症例はcIVFのみの症例123症例中5症例、Split ICSIの症例274症例中64症例に見られた。今回我々はcIVFにおいて受精卵が0個となる判断基準、すなわちICSIあるいはSplit ICSIの適応基準を明らかにするために、Split ICSIのcIVFにおいて受精卵が得られた症例と得られなかった症例の治療成績を比較検討した。【対象および方法】当クリニックにおいて2000年4月から2008年6月までの間、初回ART治療においてSplit ICSIを行った274症例のうち、cIVFにおいて受精卵が得られた210症例と得られなかった64症例を対象とした。 ＜精子の調整＞精液は液化後、精子密度勾配遠心用培地（アイソレイト2層法キット：Irivne）を用いて洗浄濃縮し、運動精子数が10μlあたり10万となるように調整し、cIVFまで室温で保持した。尚、総精子濃度、運動精子率はMakler精子濃度計算盤を用いて目視にて測定した。＜卵子の培養＞HCG投与後35時間で採取された卵子を無作為にcIVF用またはICSI用に分け、1mlのHTF（Irvine）に最大10個まで配置し、4?6時間の前培養後にcIVFとICSIに供した。 ＜cIVFの手順＞cIVFは1mlの培養液中に1?5個の卵子に対して運動精子を10万、6?10個の卵子に対して運動精子を20万添加して行った。 ＜ICSIの手順＞前培養した卵子の卵丘細胞を除去後、運動精子を不動化して卵細胞質内へ注入した。 ＜受精確認＞cIVFあるいはICSI後16?18時間目に雌雄両前核を確認出来たものを受精と判定した。 Split ICSIのcIVFにおいて受精卵が得られた症例と得られなかった症例を対象に、女性の年齢、採卵数、成熟卵子数、精子処理後の運動精子数、cIVF卵子数および受精率、ICSI卵子数および受精率、総受精卵数、対移植あたりの妊娠率を比較検討した。尚、原精液の状態では運動精子数だけでなく精液量、運動率などが処理後の結果に影響をおよぼすため、今回は精子処理後の運動精子数を比較の対象にした。次いで、有意差が認められた精子処理後の運動精子数を500万/ml未満、500?1000万/ml未満、1000?1500万/ml未満、1500?2000万/ml未満、2000万/ml以上の5群に分け、Split ICSIのcIVFにおいて受精卵が得られた症例数と得られなかった症例数の割合を比較した。【結　果】初回ART治療におけるSplit ICSIのcIVFにおいて受精卵が得られた210症例と得られなかった64症例の女性の平均年齢はそれぞれ、32.7±3.6歳と33.1±3.8歳（平均±標準偏差）、平均採卵数は12.8±4.4個と11.5±5.2個、平均成熟卵数は9.5±2.6個と9.0±4.2個、精子処理後の平均運動精子数は3492±2833万/mlと2288±2965万/ml、平均cIVF卵数は3.9±1.5個と3.5±2.0個、cIVFによる受精率は64.6%(526/814)と0%（0/221）、平均ICSI卵数は5.6±2.0と5.5±2.8個、ICSIによる受精率は83.5%(985/1180)と84.5%（299/354）、平均総受精卵数は7.2±2.4個と4.7±2.7個、対移植あたりの妊娠率は41.5%（85/210）と30.0%（18/60）となり、精子処理後の運動精子数、cIVFによる受精率、総受精卵数において、両群の間に有意な差が認められた（P<0.01）。 精子処理後の運動精子数500万/ml未満、500?1000万/ml未満、1000?1500万/ml未満、1500?2000万/ml未満、2000万/ml以上における、Split ICSIのcIVFにおいて受精卵が得られた症例数と得られなかった症例数の割合はそれぞれ、4.3%（9/210）と26.6%（17/64）、10.5%（22/210）と14.1%（9/64）、9.0%(19/210)と10.9%（7/64）、7.1%（15/210）と7.8%（5/64）、69.0%（145/210）と40.6%（26/64）となり、500万/ml未満と2000万/ml以上において、両群の間に有意な差が認められた。 【考　察】初回ART治療におけるSplit ICSIのcIVFにおいて受精卵が得られた症例と受精卵が得られなかった症例を対象に治療成績を比較検討した結果、有意な差が認められたのは精子処理後の運動精子数であった。精子処理後の運動精子数が500万/ml未満と2000万/ml以上の症例数の割合の比較において、受精卵が得られなかった症例数の割合と受精卵が得られた症例数の割合の間に有意な差が認められたことから、精子処理後の運動精子数500万/ml未満がICSIあるいはSplit ICSIの適応基準の一つと考えられ、同様に、精子処理後の運動精子数2000万/ml以上の症例はICSIあるいはSplit ICSIの必要はないと思われた。しかし、精子処理後の運動精子数が2000万/ml以上の症例においてもcIVFにおいて受精卵が得られない症例が存在することから、これらの症例を精子処理後の運動精子数からあらかじめ予測することは不可能であった。cIVFにおいて受精卵が得られた症例と得られなかった症例の女性の年齢および採卵数の間に有意な差は認められなかったことから、女性の年齢および採卵数はICSIあるいはSplit ICSIの適応基準にはならないと考えられた。また、Split ICSIのcIVFにおいて受精卵が得られなかった症例はICSIにより全症例において受精卵が得られ、cIVFによる受精卵が得られなかったため総受精卵数は有意に少なくなったものの、胚移植後、Split ICSIのcIVFにより受精卵が得られた症例と同等の妊娠率が得られたことから、初回ART治療において受精卵が得られないことを回避するためにSplit ICSIは有効であると思われた。本セッションでは、これらのデータに加え、精子処理前と処理後の精液の所見別の受精率の検討を行い、より適切なICSIあるいはSplit ICSIの適応基準について考察する。

第53回日本生殖医学会（2008.10.23-24、神戸）

当院で施行したヒト卵子凍結の検討 医療法人　絹谷産婦人科クリニック ○岡野　真一郎、絹谷　正之、平岡　謙一郎、絹谷　一雄 いぐち腎泌尿器クリニック 井口裕樹

【目的】ヒト卵子凍結の臨床成績について検討した。【対象】これまで当院で施行したヒト卵子凍結は6例で、不妊治療4例、待期目的2例(45歳未婚；将来の挙児のため、35歳未婚；乳癌の化学療法予定のため)であった。不妊治療4例の適応は男性因子3例(症例1；無精子症、症例2・4；高度乏精子症)、卵管因子1例(症例3)で、症例1は卵子数に対して新鮮TESE精子が不足したため、症例2・4は採卵当日の射出精液中に運動精子が認められなかったため、症例3は採卵当日に夫がEDとなったため、患者の同意のもと緊急処置として卵子凍結を施行した。【方法】卵子凍結は超急速ガラス化法を用い、まずMII卵子を7.5％EG＋7.5％DMSO溶液で15分間平衡し、次に15％EG+15％DMSO+0.5M Sucrose溶液に1分間浸漬した後、約1μlの凍結液と共にCryotopの先端部に載せ液体窒素中に投入した。融解は1.0M Sucrose溶液にCryotopの先端部を投入し、融解後の卵子を症例1・2・3は0.5M Sucrose溶液に3分間、0M Sucrose溶液に5分間を2回、症例4では0.5M、0.25M、0.125M Sucrose溶液に各3分間、0M Sucrose溶液に5分間浸漬し、2時間の回復培養後にICSIに供した。ICSIには症例1・2は新鮮TESE精子、症例3は凍結射出精子、症例4は凍結TESE精子を用いた。【結果】融解後の卵子生存率は各々75％(3/4)、100％(4/4)、100％(1/1)、94.4％(17/18)、全体で92.6％(25/27)、ICSI後の受精率は各々0％(0/3)、25％(1/4)、0％(0/1)、29.4％(5/17)、全体で24％(6/25)であった。症例2は受精後分割せず、症例4は4個が分割し、2個を卵子融解後３日目に同期化した子宮内に移植した。その後単胎妊娠を確認したが妊娠8週で流産となり、絨毛の染色体分析結果は47,XX,+4であった。【考察】凍結融解後の卵子生存率は高く、一方受精率はかなり低かった。一例ながら妊娠例が得られ、卵子凍結の臨床的有用性が証明されたが、その安全性・有用性について更なる検討が必要と考えられた。

第26回日本受精着床学会（2008.8.28-29、福岡）

凍結融解卵子と凍結融解精巣内精子を用いて妊娠に成功した１例 医療法人　絹谷産婦人科クリニック ○平岡　謙一郎、淵脇　恩美、平岡　夏織、岡野　真一郎、絹谷　正之、絹谷　一雄

【目的】凍結融解卵子と凍結融解精子を用いて妊娠に成功した報告は少ない。今回我々は凍結融解卵子と凍結融解精巣内精子を用いてICSIを行い、ホルモン補充周期下に胚移植し、妊娠に成功した症例を経験したので報告する。 【方法】症例は妻37歳、夫37歳。男性因子による原発性不妊のため体外受精の適応となった。事前の精液検査で乏精子症と診断されたため新鮮射出精子でのICSI を予定していた。排卵誘発はロング法により行い、経膣超音波ガイド下に19個の卵子を採取した。しかし、採卵当日に用手法にて精液を2回採取したが運動精子を確認出来ず、成熟卵子18個をガラス化法により凍結保存した。まず卵子を7.5%EG+7.5%DMSO溶液で15分間平衡し、次に卵子を15%EG+15%DMSO+0.5M Sucrose溶液に1分間浸漬した後、約1μlの凍結液と共にCryotopの先端部に載せ液体窒素中に投入した。後日、夫の精巣内精子採取術を施行し、ICSI可能な運動精子を確認できたためKS-VI保存液を用いて凍結保存した。その後、凍結融解卵子と凍結融解精巣内精子を用いてICSIを施行し、ホルモン補充周期下に胚移植した。卵子の融解は1.0M Sucrose溶液にCryotopの先端部を投入して行い、融解後の卵子を0.5M、0.25M、0.125M Sucrose溶液に各3分間、最後に0M Sucrose溶液に5分間浸漬し、2時間の回復培養後にICSIに供した。 【結果】卵子の凍結融解後の生存率は94%(17/18)、生存卵子と凍結融解精巣内精子を用いてICSIを行った結果、2PNが5個、3PNが3個、0PNが9個、正常受精と判断した胚の分割率は80%(4/5)であった。卵子融解後3日目に分割期胚2個をレーザーによる孵化補助を施行した後に子宮内へ移植した。胚移植後、21日目に行った経膣超音波検査で子宮内に胎嚢1個を確認し、28日目には胎児心拍動を確認した。現在、妊娠7週で妊娠継続中である。 【考察】凍結融解卵子と凍結融解精巣内精子を用いたICSIにより得られた胚は着床能を有していることが証明された。

第26回日本受精着床学会（2008.8.28-29、福岡）

7日目胚盤胞の凍結保存に関する検討 医療法人　絹谷産婦人科クリニック ○平岡　謙一郎、淵脇　恩美、平岡　夏織、岡野　真一郎、絹谷　正之、絹谷　一雄

【目的】7日目胚盤胞の凍結保存に関する報告は少なく、その有用性は明らかではない。そこで、今回我々は5日目、6日目、7日目胚盤胞の凍結融解胚移植の臨床成績を比較検討した。 【対象】患者の同意の上、2005年2月から2008年2月までに凍結融解胚盤胞移植を行った112症例130周期を対象に、5日目胚を移植した54症例66周期を5日目胚群、6日目胚を移植した47症例53周期を6日目胚群、7日目胚を移植した11症例11周期を7日目胚群とし、3群の凍結融解後の生存率、胚移植後の妊娠率、着床率および流産率を比較した。 【方法】胚盤胞の凍結は、保存容器にクライオトップ（北里サプライ）を用い、人工的胞胚腔収縮操作を併用したガラス化法により行った。胚盤胞の融解はホルモン補充周期下に行い、移植前に透明帯を完全に除去する透明帯孵化補助操作を施行した。回復培養後、胞胚腔の再拡張が認められた胚を生存と判定し、胚移植後の妊娠成立の有無は経膣超音波検査による胎嚢の確認で判定した。 【結果】5日目胚群、6日目胚群、7日目胚群の融解後の生存率はそれぞれ99%(104/105)、99%(78/79)、100%(16/16)、胚移植後の妊娠率は64%(42/66)、62%(33/53)、55%(6/11)、着床率は49%(51/104)、46%(36/78)、44%(7/16)、流産率は26%(11/42)、27%(9/33)、33%(2/6)となり、生存率、妊娠率、着床率および流産率いずれにおいても3群の間に統計学的に有意な差は認められなかった。 【考察】7日目胚盤胞は5日目、6日目胚盤胞と同等の着床能を持つことから、7日目胚盤胞の凍結保存は臨床上有用であることが示唆された。

第26回日本受精着床学会（2008.8.28-29、福岡）

透明帯の開孔部の大きさが凍結融解分割期胚より発生した胚盤胞移植の臨床成績におよぼす影響 医療法人　絹谷産婦人科クリニック ○平岡　謙一郎、淵脇　恩美、平岡　夏織、岡野　真一郎、絹谷　正之、絹谷　一雄

目的】透明帯孵化補助操作にレーザーを用いることで、透明帯に様々な大きさの穴を開孔することができる。しかし、透明帯孵化補助に適した開孔部の大きさは明らかではない。そこで、今回我々は透明帯の開孔部の大きさが凍結融解分割期胚より発生した胚盤胞移植の臨床成績におよぼす影響を後方視的に比較検討した。 【対象】患者の同意の上、2003年10月から2006年6月までに凍結融解分割期胚より発生した胚盤胞をホルモン補充周期下に移植した101症例101周期を対象とした。このうち、透明帯孵化補助操作を行っていない30症例30周期をコントロール群、透明帯に40μmの穴を開孔した40症例40周期をAH40M群、透明帯の外周の50%を開孔した31症例31周期をAH50%群とし、妊娠率、着床率および出産率を比較した。 【方法】凍結融解2日目胚あるいは3日目胚より発生した5日目拡張胚盤胞を移植した。透明帯孵化補助操作は、胚盤胞を0.2 mol/lスクロース溶液へ浸漬した後、レーザーを用い40μm（AH40M群）、あるいは、透明帯の外周の50%（AH50%群）を開孔した。胚移植後、妊娠成立の有無は経膣超音波検査による胎嚢の確認で判定した。 【結果】コントロール群、AH40M群およびAH50%群の妊娠率はそれぞれ17%（5/30）、43%（17/40）、74%（23/31）、着床率は10%（5/52）、27%（17/62）、52%（27/52）、出産率は13%（4/30）、38%（15/40）、65%（20/31）となり、妊娠率、着床率および出産率いずれにおいてもコントロール群に比べて、AH40M群（P＜0.05）およびAH50%群（P＜0.01）が統計学的に有意に高い値を示した。同様に、妊娠率、着床率および出産率いずれにおいてもAH40M群に比べてAH50%群が統計学的に有意に高い値を示した（P＜0.04）。 【考察】透明帯の開孔部の大きさは凍結融解分割期胚より発生した胚盤胞移植の妊娠率、着床率および出産率に影響をおよぼし、開孔する穴は大きい方が臨床成績を改善することが示唆された。

第26回日本受精着床学会（2008.8.28-29、福岡）

ビデオディスカッション「卵子・胚の凍結」 演題名：胚盤胞ガラス化保存におけるAHの必要性 医療法人　絹谷産婦人科クリニック 平岡　謙一郎、岡野　真一郎、絹谷　正之、絹谷　一雄

胚盤胞の凍結保存にガラス化法を用いることで、高い生存率が得られるようになった。しかし、当院のガラス化保存した胚盤胞移植の妊娠率は13%と、新鮮胚盤胞移植の妊娠率51%に比べて有意に低い値となった。この原因を探るため、新鮮胚盤胞とガラス化保存した胚盤胞をプロテアーゼ溶液に浸漬して透明帯が完全に溶解する時間を比較検討したところ、ガラス化保存した胚盤胞の溶解時間は120秒で、新鮮胚盤胞の溶解時間90秒に比べて有意に長い値となった。以上の結果より、ガラス化保存した胚盤胞は透明帯が硬化し、妊娠率向上には何らかの透明帯孵化補助をする必要があると考え、ガラス化保存した胚盤胞に対して透明帯孵化補助施行後に移植したところ、妊娠率は64%となり、新鮮胚盤胞移植の妊娠率と同等の成績が得られた。透明帯溶解試験の動画を中心に、当院で行っている透明帯孵化補助操作法を紹介する。

第26回日本受精着床学会（2008.8.28-29、福岡）

ビデオディスカッション「AH（アシステッドハッチング）」 演題名：胚盤胞に対する透明帯孵化補助操作の工夫点 医療法人　絹谷産婦人科クリニック 平岡　謙一郎、岡野　真一郎、絹谷　正之、絹谷　　一雄

我々が行った検討により、胚盤胞の透明帯孵化補助において、開孔部の大きさは胚移植後の臨床成績に影響をおよぼすことが示唆された。この結果を基に、当クリニックで行っている胚盤胞に対する透明帯孵化補助操作の工夫点を、以下に示すと共に、動画を用いて紹介したい。 工夫点 �@　0.2 mol/lスクロース溶液の使用 �A　透明帯全周の50%以上を開孔 �B　レーザーの使用 �C　ホールディングピペットの使用 理　由 �@　胚盤胞を収縮させることで、より安全に透明帯孵化補助操作を行える �A　凍結融解分割期胚より発生した胚盤胞移植において、透明帯を40μm開孔した患者群と透明帯全周の50%を開孔した患者群の胚移植後の妊娠率を比較した結果、透明帯全周の50%を開孔した患者群の妊娠率が有意に高かった �B　レーザーを用いることで短時間に大きく開孔できる �C　ホールディングピペットで胚盤胞を保定することで正確に開孔できる

第49回日本哺乳動物卵子学会（2008.517-18、名古屋）

演題名： 透明帯の開孔部の大きさが凍結融解分割期胚より発生した胚盤胞移植の臨床成績におよぼす影響 Effect of the size of zona pellucida opening on clinical outcome of frozen cleaved embryos that were cultured to blastocyst after thawing 医療法人　絹谷産婦人科クリニック ○平岡　謙一郎、淵脇　恩美、平岡　夏織、岡野　真一郎、絹谷　正之、絹谷　一雄

【目的】透明帯孵化補助操作にレーザーを用いることで、透明帯に様々な大きさの穴を正確に開孔することができる。しかし、開孔部の大きさは報告により異なり、透明帯孵化補助操作に適した開孔部の大きさは明らかではない。そこで、今回我々は透明帯の開孔部の大きさが凍結融解分割期胚より発生した胚盤胞移植の臨床成績におよぼす影響を後方視的に比較検討した。更に、凍結融解操作が透明帯硬化におよぼす影響も比較検討した。 【対象】（検討1）患者の同意の上、2003年10月から2006年6月までに凍結融解分割期胚より発生した胚盤胞をホルモン補充周期下に移植した101症例101周期を対象とした。このうち、透明帯孵化補助操作を行っていない30症例30周期をコントロール群、透明帯に40μmの穴を開孔する透明帯孵化補助操作を行った40症例40周期をAH40M群、透明帯に外周の50%の穴を開孔する透明帯孵化補助操作を行った31症例31周期をAH50%群とし、妊娠率、着床率および出産率を比較した。尚、今回対象となった101症例は全て過去に2回以上胚移植を行うも妊娠に至らなかった反復不成功例であった。（検討2）新鮮胚盤胞10個および凍結融解分割期胚より発生した胚盤胞10個に酵素処理を行い、透明帯消化時間を比較した。尚、この検討は余剰胚の破棄を希望する患者の同意を得た上で行った。 【方法】（検討1）耐凍剤にエチレングリコールを用いた緩慢凍結法により凍結・融解した2日目あるいは3日目分割期胚を継続培養し、ガードナーの分類1）でグレードがBB以上の5日目拡張胚盤胞を移植した。透明帯孵化補助操作は胚盤胞期に行った。先ず、0.2 mol/lスクロース溶液へ胚盤胞を浸漬し、胞胚腔を収縮させ、囲卵腔を拡げた。次いで、Pulse 500μsec（Power 100%）のレーザー（Zilos-tk：Hamilton Thorn社、USA）を用い、透明帯に直径10μmの穴を連続的に開けることにより40μm（AH40M群）、あるいは、透明帯の外周の50%（AH50%群）を開孔した。胚移植後、妊娠成立の有無は経膣超音波検査による胎嚢の確認で判定した。（検討2）新鮮胚盤胞および凍結融解分割期胚より発生した胚盤胞を10 IU/mlのプロテアーゼ溶液に浸漬し、透明帯が完全に溶解する時間を計測した。 【結果】（検討1）コントロール群、AH40M群およびAH50%群の妊娠率はそれぞれ17%（5/30）、43%（17/40）、74%（23/31）、着床率は10%（5/52）、27%（17/62）、52% （27/52）、出産率は13%（4/30）、38%（15/40）、65%（20/31）となり、妊娠率、着床率および出産率いずれにおいてもコントロール群に比べて、AH40M群（P < 0.05）およびAH50%群（P < 0.01）が統計学的に有意に高い値を示した。同様に、妊娠率、着床率および出産率いずれにおいてもAH40M群に比べてAH50%群が統計学的に有意に高い値を示した（P < 0.04）。（検討2）新鮮胚盤胞および凍結融解分割期胚より発生した胚盤胞の酵素処理による透明帯消化時間（平均±標準偏差)はそれぞれ90.3±9.8秒、104.9±10.1秒となり、凍結融解分割期胚より発生した胚盤胞が新鮮胚盤胞に比べて統計学的に有意に長い値を示した（P < 0.01）。 【考察】今回の比較検討の結果、凍結融解操作が透明帯硬化を引き起こし、胚の透明帯からの脱出障害により凍結融解胚移植の臨床成績は低くなることが示唆された。しかし透明帯を開孔する透明帯孵化補助操作を行うことで臨床成績は改善した。更に、透明帯の開孔部の大きさは凍結融解胚移植の妊娠率、着床率および出産率に影響をおよぼし、開孔する穴は大きい方が臨床成績を改善することが示唆された。 【文献】1) Gardner DK, Schoolcraft WB: In-vitro culture of human blastocysts. In Towards reproductive certainty: infertility and genetics beyond 1999, Jansen R and Mortimer D (eds), London, UK, Parthenon Press, 1999, pp 378-388.

第48回日本哺乳動物卵子学会（2007.5.27-28、山梨）

演題名: ガラス化法により凍結融解したヒト7日目胚盤胞の胚移植により妊娠が成立した1例 医療法人　絹谷産婦人科クリニック ○平岡謙一郎、淵脇恩美、平岡夏織、絹谷正之、絹谷一雄

【目的】ヒト5日目あるいは6日目胚盤胞の凍結保存に関する報告は多くされているが、7日目胚盤胞の凍結保存に成功したという報告は殆どない。今回我々は、ヒト7日目胚盤胞をガラス化法により凍結保存し、融解移植にて妊娠に成功したので報告する。 【方法】凍結融解胚移植を行ったときの患者年令は妻35歳、夫42歳で結婚10年目であった。他院にて、2年間に人工授精を4周期、体外受精を2周期（2日目胚移植と5日目胚移植を1周期ずつ）、凍結融解胚移植を3周期（全て2日目胚）行うも妊娠に至らず、原因不明の原発性不妊として当院へ紹介となった。3回目の体外受精はロング法により卵巣刺激を行い、経膣超音波ガイド下に12個の成熟卵子を採取し、凍結保存しておいた夫の精子を用いた顕微授精により11個が受精した。二段階胚移植を予定していたが、5日目に胚盤胞が得られず、1回目の移植（2日目胚を1個移植）のみ行ったが妊娠には至らなかった。その際、残りの余剰胚10個の培養を継続したところ、6日目に1個、7日目に2個が拡張胚盤胞へ発生したため、ガラス化法により凍結保存を行った。20% Serum Substitute Supplement + Modified-HTFを基礎培養液として、まず拡張胚盤胞を7.5% Ethylene Glycol (EG) + 7.5% Dimethyl Sulfoxide (DMSO)溶液中で胚盤胞よりも一回り小さい直径のガラスピペットでピペッティングを行うことにより胞胚腔を完全に収縮させた。次に胚盤胞を15% EG + 15% DMSO + 0.5M Sucrose溶液の小滴（約1μl）と共に45秒以内にクライオトップの先端部に載せ、滅菌した液体窒素中に投入した。採卵から2ヶ月後、7日目胚盤胞を2個融解し、ホルモン補充周期下に融解胚移植を行った。融解は1.0M Sucrose溶液中にクライオトップの先端部を投入して行った。融解後の胚盤胞は0.5M Sucrose溶液に3分間、基礎培養液に2回各5分間侵漬している間に透明帯を完全に除去する透明帯孵化補助操作を行った。回復培養から2時間後、融解した7日目胚盤胞は2個共に胞胚腔の再拡張が認められ、生存が確認された。2個の融解胚盤胞を胚移植後、18日目に経膣超音波検査で子宮内に胎嚢2個を確認したが、胎児心拍動が確認できたのは1個のみであった。現在妊娠22週で経過は順調である。 【考察】我々の知る限り凍結融解したヒト7日目胚盤胞の胚移植による妊娠の報告は緩慢凍結法による1報のみで、ヒト7日目胚盤胞のガラス化法による凍結融解移植後の妊娠の報告はなく、本症例が初めての成功例と思われる。 【文献】Sills ES, et al.: Fertil Steril. 79, 424-427, 2003.

第2回日本レーザーリプロダクション研究会（2007.3.4、東京）

演題名: 胚盤胞移植におけるアシステッドハッチングの有用性（酸性タイロードとレーザーの比較検討） 医療法人　絹谷産婦人科クリニック ○平岡謙一郎、淵脇恩美、平岡夏織、絹谷正之、絹谷一雄

【目的】アシステッドハッチング (AH) は移植胚の透明帯を操作して、着床率を向上させる技術である。従来、当クリニックでは酸性タイロードを用いてAHを施行してきたが、2005年4月よりレーザーを用いる方法に変更した。今回我々は、この変更が胚盤胞移植の臨床成績におよぼす影響を調べたので報告する。【対象・方法】凍結融解初期胚より発生した胚盤胞および凍結融解胚盤胞に対して、酸性タイロードあるいはレーザーを用いたAHを施行し、移植後の臨床成績を後方視的に比較検討した。 【検討1】凍結融解初期胚より発生した胚盤胞に対して、酸性タイロードを用いて40μmの穴を開孔するAHを施行した20周期をT40群、レーザーを用いて40μmの穴を開孔するAHを施行した20周期をL40群、レーザーを用いて40μmより大きい穴を開孔するAHを施行した31周期をL>40群として、胚移植後の妊娠率および着床率を比較した。T40群、L40群、L>40群の妊娠率はそれぞれ45% (9/20)、40% (8/20)、74% (23/31)、着床率は28% (9/32)、27% (8/30)、50% (25/50) となり、妊娠率および着床率においてL>40群が他の2群に比べて有意に高い値を示した (P < 0.05）。以上の結果より、開孔する穴が大きい方が臨床成績を改善することが示唆された。 【検討2】凍結融解した胚盤胞に対して、酸性タイロードを用いて透明帯に40μmの穴を開孔するAHを施行した45周期をT40群、レーザーを用いて透明帯を除去するAHを施行した55周期をLR群として、胚移植後の妊娠率および着床率を比較した。T40群とLR群の妊娠率は42% (19/45) と65% (36/55)、着床率は30% (23/77) と55% (45/82) となり、妊娠率および着床率においてLR群がT40群に比べて有意に高い値を示した (P < 0.05）。以上の結果より、透明帯を除去する方が開孔するだけよりもより有効であることが示唆された。 【考察】AHにレーザーを用いることにより、安全に大きく開孔することや透明帯を除去することが可能となり、胚盤胞移植のAHには酸性タイロードを用いる方法よりも、レーザーを用いる方法がより有用であると考えられた。

第24回日本受精着床学会（2006.9.21-22、軽井沢）

演題名: 凍結融解胚盤胞移植におけるassisted hatchingの有用性（透明帯の一部開孔と完全除去の比較検討） 絹谷産婦人科クリニック ◯平岡謙一郎、淵脇恩美、絹谷正之、絹谷一雄

【目的】凍結融解胚盤胞のassisted hatching（AH）には透明帯の一部を開孔する方法あるいは透明帯を完全に除去する方法が報告されているが、いずれの方法がより有用であるか比較検討を行った報告はない。そこで、今回我々は凍結融解胚盤胞に対して透明帯の一部を開孔あるいは透明帯を完全に除去するAHを行い、移植後の臨床成績の比較検討を後方視的に行った。 【対象】患者の同意の上、2003年11月から2005年11月までに凍結融解胚盤胞移植を行った90症例90周期を対象に、透明帯の一部を開孔するAHを施行した45症例45周期を開孔群、透明帯を完全に除去するAHを施行した45症例45周期を除去群とし、両群の妊娠率および着床率を比較した。 【方法】胚盤胞の凍結は、凍結容器にクライオトップ（北里サプライ）を用い人工的胞胚腔収縮操作を併用したVitrification法により行った。AHは融解直後、胞胚腔が収縮している間に行った。透明帯の開孔は直径10μmのマイクロピペットにて酸性タイロード液を吹き付け、35-40μmの穴を開けることにより行った。透明帯の除去はPulse 500μsec（Power 100%）のレーザー（Zilos-tk：Hamilton Thorn社、USA）を用い透明帯全周の60-90%に直径10μmの穴を連続的に開けた後、胚をピペッティングし、透明帯と完全に分離させることにより行った。回復培養後、胞胚腔の再拡張が認められた胚を生存と判定し、妊娠成立の有無は経膣超音波検査による胎嚢の確認で判定した。 【結果】開孔群および除去群における融解後の生存率はそれぞれ98.7%(77/78)および95.7%(67/70)、胚移植後の妊娠率は42.2%(19/45)および64.4%(29/45)、着床率は29.9%(23/77)および53.7%(36/67)となり、妊娠率および着床率において除去群が統計学的に有意に高い値を示した(P＜0.03、P＜0.01)。 【考察】凍結融解胚盤胞移植のAHには透明帯の一部を開孔する方法よりも、透明帯を完全に除去する方法がより有用であることが示唆された。

生殖バイオロジー東京シンポジウム（基礎セミナー、2006.7.16、東京）

演題名: 着床率向上のための工夫 絹谷産婦人科クリニック ◯平岡　謙一郎、絹谷　正之

ヒト生殖補助医療において着床率を向上させるための有効な手段の一つに胚盤胞移植が挙げられる。近年、連続型組織培養液が開発されて以来、ヒト胚盤胞の作出が容易になってきた。胚盤胞移植は着床率が高いため、移植胚数を制限して多胎妊娠を防ぐ必要があり、余剰の胚盤胞が生じる症例が多くある。このことにより胚盤胞の安定した凍結保存技術が必須となっている。ヒト胚盤胞の凍結保存は1985年に初めての成功例が報告されて以来、緩慢凍結法が広く使用されてきた。しかしながら、緩慢凍結法による胚盤胞の凍結保存の有用性は報告されているものの、満足する成績の報告は少なく、胚盤胞移植の臨床応用における問題点とされている。2000年以降、緩慢凍結法に代わる方法としてVitrification法による凍結保存法が胚盤胞の凍結保存において臨床応用され、その有用性が多く報告されている。しかし、胚盤胞の発育ステージが進み、胞胚腔が大きくなる程（特に拡張期以降の胚盤胞）、融解後の生存率が低下することが問題となっている。胞胚腔が大きくなると、胞胚腔内部に凍結保護剤が十分に透過せず、胞胚腔内部に氷晶が形成され物理的に破壊されることが原因と考えられる。この問題点を解決するために、当クリニックでは胚盤胞の凍結保存を人工的に胞胚腔を収縮させる操作を併用したVitrification法により行い、その有用性を拡張期胚盤胞において確認後、同じ方法を脱出胚盤胞の凍結及び分割期で一度凍結した胚より発生した胚盤胞の再凍結に用いて高い生存率を得ることができ、妊娠・出産にも成功した。しかしながら、人工的胞胚腔収縮操作により生存率は改善されたものの、凍結融解後の形態が良好な胚盤胞を移植しても妊娠に至らないケースが見られ、その原因の一つとして、凍結処理による透明帯の硬化が考えられた。そこで、我々は融解胚盤胞の着床率向上のため透明帯の一部を開孔する透明帯孵化補助操作を行い、その有用性を確認し、透明帯を完全に除去する方法に改良したことにより更に着床率の向上が認められた。ここでは、これらの手法および臨床成績を示すことにより、当クリニックで行っている余剰胚盤胞の着床率向上のための工夫について紹介したい。

第47回日本哺乳動物卵子学会（胚培養士セッション、2006.5.27-28、東京）

演題名: 当院におけるICSIの成績向上のための改良点 絹谷産婦人科クリニック ◯平岡謙一郎、淵脇恩美、平岡夏織、絹谷正之、絹谷一雄

生殖補助医療において卵細胞質内精子注入法（intracytoplasmic sperm injection: ICSI）は必須の技術であり、我々胚培養士はICSIにより１個でも多くの受精卵を得ることが求められている。ICSIを行うには卵丘細胞の除去、精子の卵細胞質内への注入が必要となり、侵襲的なこれらの操作がICSI後の卵子の生存率及び受精率に多大な影響をおよぼす。 当クリニックにおいてICSIによる治療を開始した平成12年度と本年度（平成17年度）のICSI後の生存率（生存卵子数／ICSI卵子数）はそれぞれ83.6% (418/500)、97.3% (995/1022)、受精率（受精卵子数／生存卵子数）はそれぞれ81.3% (340/418)、91.3% (908/995)となり、平成17年度の生存率及び受精率が平成12年度の成績に比べて有意に高い値を示した（P<0.01）。当クリニックにおける、この5年間の卵丘細胞の除去法、精子の卵細胞質内への注入法における変更点がICSI後の卵子の生存率及び受精率におよぼした影響を検討し、成績向上に結び付いたと思われる改良点について報告する。

第23回日本受精着床学会（2005.9.4-5、大阪）

演題名: 融解分割期胚より発生した胚盤胞期胚の再凍結は有用か？ 絹谷産婦人科クリニック ◯平岡　謙一郎、絹谷　正之、絹谷　一雄

【目的】近年、ヒト胚盤胞期胚の凍結保存に関する報告は数多くされているものの、前核期あるいは分割期で一度凍結し融解後に胚盤胞期に発生した胚の再凍結保存に関する報告は少なく、その有用性・安全性は明らかにされていない。今回我々は、分割期で一度緩慢凍結した胚を融解し、胚盤胞期まで発生した胚をVitrification法により再凍結し、その後融解移植を行い良好な成績が得られたので報告する。 【方法】患者の同意の下、緩慢凍結により凍結保存した分割期胚（Day 2またはDay 3胚）を融解後、追加培養し、胚盤胞移植により生じた余剰胚をVitrification法により再凍結保存し、融解後に胚移植を行い（再凍結群）、その有用性を凍結胚盤胞（Vitrification法により胚盤胞期にて一度だけ凍結・融解：コントロール群）での成績と比較した。凍結は、まず胚盤胞を7.5%EG+7.5%DMSO+20%SSS+PBS液でピペッティングにより胞胚腔を完全に収縮させた後、更に2分間平衡した。次に胚盤胞を約1μlの15%EG+15%DMSO+0.5M Sucrose+20%SSS+PBS液と共に45秒以内にCryotopの先端部に載せ、滅菌した液体窒素中に投入した。融解は1M Sucrose液にCryotopの先端部を投入して行った。融解後の胚盤胞は0.5M Sucrose液に3分間、20%SSS+PBS液に2回各5分間侵漬し、3時間の回復培養後に胚移植を行った。融解後、胞胚腔の再拡張が認められた胚を生存と判定し、妊娠成立の有無は経膣超音波検査による胎嚢の確認で判定した。 【結果】再凍結群およびコントロール群における融解後の生存率はそれぞれ92%(11/12)および99%(69/70)、胚移植後の妊娠率は57%(4/7)および46%(19/41)、着床率は42%(5/12)および33%(22/69)であった。 【考察】一度分割期にて凍結・融解後に胚盤胞期まで発生し、再凍結した胚盤胞は融解後の生存率、移植後の妊娠率および着床率は一度だけ凍結した融解胚盤胞の成績と同等であり、ヒト胚盤胞の再凍結は臨床上有用であることが示唆された。

第22回日本受精着床学会（世界体外受精会議記念賞候補演題、2004.9.2-4、旭川）

演題名: ヒト脱出胚盤胞をVitrification法により凍結保存し妊娠出産に成功した１例 絹谷産婦人科クリニック ◯平岡　謙一郎、平岡　夏織、絹谷　正之、絹谷　一雄

【目的】ヒト脱出胚盤胞の凍結保存による妊娠報告は少ない。今回我々はヒト脱出胚盤胞をVitrification法により凍結保存し、融解移植にて妊娠出産に至った症例を経験したので報告する。 【方法】症例は妻31歳、夫31歳。卵管閉塞による続発性不妊の為、IVFの適応となった。分割期新鮮胚移植を1周期、分割期胚の凍結融解移植を1周期行うも妊娠には至らなかった。2回目のIVFでは6個の受精卵が得られ、Day 3に分割期胚を2個、Day 5に胚盤胞を1個移植（二段階胚移植）するも妊娠には至らなかった。その際、残りの余剰胚3個をDay 6まで培養したところ、1個が完全な脱出胚盤胞となった。我々はこれまで拡張期胚盤胞をピペッティングで人工的に胞胚腔を収縮させた後にVitrification法により凍結保存を行い、融解後の生存率95%(18/19個)、融解移植後の着床率44%(8/18個)、妊娠率60%(6/10周期)という成績を得ていた。そこで脱出胚盤胞に対しても同じ方法を用いて凍結保存を行った。まず脱出胚盤胞を7.5%EG+7.5%DMSO+20%SSS+PBS液で胚盤胞よりも一回り小さい直径のガラスピペットでピペッティングを行うことにより胞胚腔を完全に収縮させた後、更に2分間平衡した。次に胚盤胞を15%EG+15%DMSO+0.5M Sucrose+20%SSS+PBS液の小滴（約1μl）と共に45秒以内にCryotopの先端部に載せ、液体窒素中に投入した。融解は1.0M Sucrose液にCryotopの先端部を投入して行った。融解後の胚盤胞は0.5M Sucrose液に3分間、20%SSS+PBS液に2回各5分間侵漬し、2時間の回復培養後に胚移植を行った。尚、凍結・融解の操作は全て38℃のウォーマー上で行った。胚移植後16日目に子宮内に胎嚢1個を確認、妊娠38週で健常な女児の出産に至った。 【考察】我々の知る限りヒト脱出胚盤胞の凍結融解移植後の妊娠報告は緩慢凍結法による2報のみで、ヒト脱出胚盤胞のVitrification法による凍結融解移植後の妊娠出産の報告は無く、本症例が世界初の成功例と思われる。

第22回日本受精着床学会（世界体外受精会議記念賞候補演題、2004.9.2-4、旭川）

演題名: ヒト脱出胚盤胞をVitrification法により凍結保存し妊娠出産に成功した１例 絹谷産婦人科クリニック ◯平岡　謙一郎、平岡　夏織、絹谷　正之、絹谷　一雄

【目的】ヒト脱出胚盤胞の凍結保存による妊娠報告は少ない。今回我々はヒト脱出胚盤胞をVitrification法により凍結保存し、融解移植にて妊娠出産に至った症例を経験したので報告する。 【方法】症例は妻31歳、夫31歳。卵管閉塞による続発性不妊の為、IVFの適応となった。分割期新鮮胚移植を1周期、分割期胚の凍結融解移植を1周期行うも妊娠には至らなかった。2回目のIVFでは6個の受精卵が得られ、Day 3に分割期胚を2個、Day 5に胚盤胞を1個移植（二段階胚移植）するも妊娠には至らなかった。その際、残りの余剰胚3個をDay 6まで培養したところ、1個が完全な脱出胚盤胞となった。我々はこれまで拡張期胚盤胞をピペッティングで人工的に胞胚腔を収縮させた後にVitrification法により凍結保存を行い、融解後の生存率95%(18/19個)、融解移植後の着床率44%(8/18個)、妊娠率60%(6/10周期)という成績を得ていた。そこで脱出胚盤胞に対しても同じ方法を用いて凍結保存を行った。まず脱出胚盤胞を7.5%EG+7.5%DMSO+20%SSS+PBS液で胚盤胞よりも一回り小さい直径のガラスピペットでピペッティングを行うことにより胞胚腔を完全に収縮させた後、更に2分間平衡した。次に胚盤胞を15%EG+15%DMSO+0.5M Sucrose+20%SSS+PBS液の小滴（約1μl）と共に45秒以内にCryotopの先端部に載せ、液体窒素中に投入した。融解は1.0M Sucrose液にCryotopの先端部を投入して行った。融解後の胚盤胞は0.5M Sucrose液に3分間、20%SSS+PBS液に2回各5分間侵漬し、2時間の回復培養後に胚移植を行った。尚、凍結・融解の操作は全て38℃のウォーマー上で行った。胚移植後16日目に子宮内に胎嚢1個を確認、妊娠38週で健常な女児の出産に至った。 【考察】我々の知る限りヒト脱出胚盤胞の凍結融解移植後の妊娠報告は緩慢凍結法による2報のみで、ヒト脱出胚盤胞のVitrification法による凍結融解移植後の妊娠出産の報告は無く、本症例が世界初の成功例と思われる。

第21回日本受精着床学会（世界体外受精会議記念賞候補演題、2003.10.2-3、東京）

演題名: ヒト分割期胚の緩慢凍結におけるエチレングリコールの有用性 絹谷産婦人科クリニック ◯平岡　謙一郎、平岡　夏織、絹谷　正之、絹谷　一雄

【目的】各種実験動物胚の凍結保存には耐凍剤としてエチレングリコール(EG)を用いた緩慢凍結および急速凍結の有用性が報告されているが、ヒト胚の凍結保存においては急速凍結にはEGが用いられているものの、緩慢凍結には主にプロパンジオール(PROH)が用いられEGを耐凍剤として用いた報告は少ない。そこで今回我々はヒト分割期胚の緩慢凍結においてPROHとEGの成績を比較しEGの有用性について検討した。 【対象】2002年4月〜2003年3月の間、当クリニックにて自然周期またはホルモン補充周期下に凍結融解胚移植を行った26症例33周期を対象とした。このうちPROHを耐凍剤として用いて凍結保存した17症例23周期をPROH群、EGを用いて凍結保存した9症例10周期をEG群とした。PROH群、EG群の患者平均年齢は33.6±5.3歳v.s.32.0±3.8歳、凍結前の良好胚率（Day 2では4細胞期以上、Day 3では6細胞期以上でVeeckの分類grade 1,2の胚）は68.8%(44/64)v.s.64.0%(16/25)であった。 【方法】凍結液は最終濃度1.5M PROHまたは1.4M EGを含む20%Serum Substitute Supplement+0.1M Sucrose+リン酸緩衝液を用い、胚をストローに封入後、液体窒素バス式のプログラムフリーザーを用いて緩慢凍結を行った。融解は5段階希釈にて行い、融解後、割球の生存率が75%以上の胚を生存胚と判定した。 【結果】PROH群、EG群の融解後の生存率は56.3%(36/64)v.s.84.0%(21/25)、融解胚移植における着床率は5.6%(3/54)v.s.25.0%(6/24)、妊娠率は13.0%(3/23)v.s.50.0%(5/10)となり生存率、着床率および妊娠率いずれにおいてもEG群がPROH群に比べて有意に高い値を示した（P<0.02、P<0.03、P<0.04）。 【考察】PROH群とEG群の成績を比較した結果、EG群で有意な生存率、着床率および妊娠率の上昇が認められたことから、ヒト分割期胚の緩慢凍結における耐凍剤としてEGは有用と考えられた。

第48回日本不妊学会（2003.10.1-2、東京）

演題名: ARTにおける多胎妊娠発生に及ぼす因子の検討 絹谷産婦人科クリニック ◯絹谷　正之、平岡　夏織、平岡謙一郎、絹谷　一雄

【目的】ARTにおいて多胎妊娠の発生は解決すべき重要な課題の一つである．これまでは平成8年の日本産科婦人科学会の会告に基づき移植する胚の数は3個以内が原則とされてきているが，多胎妊娠が母児および周産期医療に及ぼす影響は深刻であり，日本においても移植する胚の数を2個以内に制限すべきとの意見もある．そこで今回我々はこれまでのARTによる妊娠例を解析し，多胎妊娠発生に及ぼす諸因子について検討した． 【対象】2000年4月より2002年4月の間に当クリニックで行ったART治療で臨床的妊娠が成立した93症例95周期を対象とした． 【方法】年齢，不妊期間，不妊原因，採卵数，受精卵数，移植胚数，採卵時血清エストラジオール値，胚移植時内膜の厚さ，過去の移植回数等について後方視的に検討した． 【成績】単胎妊娠66例，多胎妊娠29例（双胎24例，品胎5例）で，全体の多胎率は30.5%であった．年齢，不妊期間，採卵数，移植胚数，採卵時血清エストラジオール値，移植時内膜の厚さ，過去の移植回数は単胎妊娠と多胎妊娠との間に差異はなく，不妊原因もほほ同様の傾向を示したが，受精卵数が単胎妊娠5.6±3.3個，多胎妊娠8.3±4.5個と多胎妊娠例で有意に多かった(P＜0.01)．また移植胚数別の検討では，3個移植時の単胎妊娠が35例，多胎妊娠21例（双胎18例，品胎3例）で多胎率が37.5%と最も高く，そのうちの19例（90.5%）は受精卵が4個以上の症例であった． 【結論】受精卵数は多胎妊娠発生に影響を及ぼす重要な因子と考えられ，受精卵が多く，移植するための良好な胚を選別できる症例では移植胚数を2個以内に制限するこは多胎妊娠予防において有用と考えられた．しかし受精卵数の少ない症例では移植胚数を制限することは妊娠率を低下させる可能性があり，個々の症例を慎重に検討し移植する胚の数を決定することも重要と考えられた．

第47回日本不妊学会（2002.10.3-4、岐阜） 　　　　（岐阜長良川の鵜飼い風景）

演題名: ART反復不成功例における二段階胚移植法の有用性に関する検討 絹谷産婦人科クリニック ◯絹谷　正之、平岡　夏織、平岡謙一郎、絹谷　一雄

【目的】近年、ARTにおいて二段階胚移植法（以下、2-step ET）が着床環境を改善し 、有用との報告がなされている。一方、ART反復不成功例に対する確立された治療法はない。そこで今回我々はART反復不成功例に対して2-step ETを施行し、その有用性について検討した。 【対象】当院にて2000年10月〜2002年4月の間、受精卵が4個以上で、過去に３回以上新鮮胚移植を施行するも妊娠に至らなかったART治療の内、同意の得られた24症例31周期を対象とした。このうち通常の移植のみで2-step ETを施行しなかった症例（19症例26周期）をconventional-ET群、2-step ETを施行した症例（5症例5周期）を2-step ET群とした。conventional-ET群と2-step ET群の患者平均年齢は34.0±3.6歳v.s.33.6±3.9歳、過去の平均移植回数は4.4±1.9回v.s.6.4±2.7回、平均受精卵数は7.5±3.5個v.s.7.4±1.7個、平均移植胚数は3.9±1.5個v.s3.2±0.8個、平均移植時内膜厚は11.2±2.6mm v. s.12.0±1.7mmであった。 【方法】conventional-ETではday2に1回だけ胚移植を行い、2-step ETではday2にVeeck分類により形態学的に2番目と3番目に良好と判定した胚2個を移植し、その後day5に胚盤胞胚を1個または2個再度移植した。胚移植はEdwards-Wallace ETカテーテルを使用し 、経腹超音波ガイド下に施行した。培養液はday2まではHTF+10％SSS、day3以降はComplete Blastocyst Mediumを使用した。妊娠は経膣超音波検査による胎嚢の確認により判定した。 【成績】conventional-ET群と2-step ET群の着床率は12.7％（13/102）v.s.50.0％（8/16）、妊娠率は42.3％（11/26）v.s.80.0％（4/5）で、conventional-ET群に比べ2-step ET群が有意に高い着床率を認め（P＜0.01）、妊娠率も高い傾向を示した。 【結論】今回の検討により2-step ETはART反復不成功例において有用な治療法であることが示唆された。今後は症例を重ねその有用性を更に検討して行く事が重要と考えられた。

第43回日本哺乳動物卵子学会（2002.5.31-6.1、和歌山）

演題名: 酸素濃度がヒト初期分割胚移植（Day 2 , Day 3 ）におよぼす影響 絹谷産婦人科クリニック ◯平岡謙一郎、平岡　夏織、絹谷　正之、絹谷　一雄

【目的・背景】現在、ART(Assisted Reproductive Technology)において胚の培養には主に5%CO2-5%O2-90%N2(5%O2)あるいは5%CO2-95%air（20%O2）の気相条件が用いられている。いずれの気相条件においても同様の妊娠率が報告されている。ヒトのIVFにおいて5%O2と20%O2を比較したところ初期分割胚移植において妊娠率に差が無いことが報告されているが1)、ヒトIVFにおいて気相条件の違いにより成績を比較した報告は少ない。そこで今回我々は、酸素濃度がヒト初期分割胚移植におよぼす影響について調べた。 【対象・方法】2001年7月〜2001年12月の期間、当クリニックにおいてART治療（IVF-ET、新鮮胚のみ採卵後2日目または3日目に移植）を施行した72周期を対象とした。このうち6%CO2-94%airの気相条件で培養をした41周期を20%O2群、6%CO2-5%O2-89%N2で培養した31周期を5%O2群とし、両群の成熟卵子当たりの受精率、受精卵当たりの分割率、分割胚当たりの良好胚獲得率、胚移植当たりの着床率および妊娠率を比較した。また、双方の気相条件での培養により治療経験のある同一症例11組29周期（20%O2：18周期、5%O2：11周期）についても比較検討した。良好胚の定義はVeeckの分類に従い、Day 2においては4細胞期以上でgrade1,2、Day 3においては6細胞期以上でgrade1,2とした。胚培養には両群共にHTF+10%SSSを用いた。6%CO2-94%airと6%CO2-5%O2-89%N2の気相条件で12時間平衡化した培養液のpH、pCO2、pO2はそれぞれ7.255 ± 0.013 v.s. 7.251 ± 0.013、44.175 ±1.290 mmHg v.s.45.850 ± 2.356 mmHg、156.625 ± 10.579 mmHg v.s. 65.800 ± 4.464 mmHgであった。 【結果】20%O2群と5%O2群の分割率は96.3%(184/191) v.s. 99.5%(181/182)、良好胚獲得率は26.6% (49/184) v.s. 45.9% (83/181)で、20%O2群に比べて5%O2群が有意に高い値を示したが、その他の受精率、着床率、妊娠率では両群に有意差は認められなかった（表１）。同一症例においては受精率、分割率、良好胚獲得率に有意差は認められなかった（表２）が、11症例中5症例が6%CO2-5%O2-89%N2の気相条件で培養することにより臨床的妊娠に至った。 【結論】ヒト初期分割胚の採卵後2〜3日目までの培養期間における6%CO2-5%O2-89%N2の気相条件の有用性が示唆された。 【文献】 1)Dumoulin, J.C.M.,Meijers, C.J.J.,Bras, M.et al.(1999) Effect of oxygen concentration on human in-vitro fertilization and embryo culture.Hum Reprod., 14, 465-469

第19回日本受精着床学会（2001.7.12-13、横浜）

演題名: ART反復不成功例に対するassisted hatchingの有用性に関する検討 絹谷産婦人科クリニック ◯平岡謙一郎、平岡　夏織、絹谷　正之、絹谷　一雄

【目的】ARTにおけるassisted hatching（以下AH）の有用性はこれまでに数多く報告されている。しかし適応はまだ確立されておらず、当クリニックでも様々な症例にAHを施行している。今回はART反復不成功例に対するAHの有用性について検討した。 【対象】2000年4月〜2001年3月の期間、当クリニックにおいて３回以上胚移植を施行するも妊娠に至らなかった18症例21周期のART治療（IVF-ET、凍結融解胚移植）を対象とした。このうちAHを施行しなかった9症例11周期をコントロール群、AHを施行した9症例10周期をAH群とした。コントロール群とAH群の患者平均年齢はそれぞれ30.4±2.9歳v.s.34.1±5.1歳、過去の平均移植回数は4.6±0.8回v.s.7.5±3.4回、平均移植胚数は3.2±1.7個v.s.4.0±1.9個、平均移植良好胚数は1.5±1.7個 v. s.2.1±1.4 個、平均移植時内膜厚は11.2±2.4mm v. s.10.8±3.0mmであった。 【方法】AHは胚移植当日に施行した。ホールディングピペットで吸引保持した2〜8細胞期胚に3時方向から直径10μmのマイクロピペットにて酸性タイロード液を吹き付け、透明帯の外層を広範囲に溶解し、内層は温存するzona thinning法を用いた。尚、胚移植は採卵2日後または3日後に施行した。 【結果】コントロール群とAH群の着床率は5.7%（2/35）v.s.15.0%（6/40）、妊娠率はそれぞれ9.1%（1/11）v.s.50.0%（5/10）で、コントロール群に比べAH群が有意に高い妊娠率を示した（P<0.04）。 【考察】今回の検討により、ART反復不成功例に対してAHは極めて有用な治療法の１つであることが確認され、AHはART実施施設における必須の治療法と考えらえた。